伯樂bio-rad電泳的基本原理
伯樂bio-rad電泳的基本原理 | 時(shí)間: March-23 20:50:00 | 分類:技術(shù)欄目
凌儀生物專業(yè)提供高速離心機(jī)，美國(guó)Bio-rad伯樂電泳儀，德國(guó)eppendorf艾本德移液器，PCR基因擴(kuò)增儀，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，要省錢，別錯(cuò)過(guò)哦。電泳過(guò)程必須在一種支持介質(zhì)中進(jìn)行。Tiselius等在1937年進(jìn)行的自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì)，所以擴(kuò)散和對(duì)流都比較強(qiáng)，影響分離效果。于是出現(xiàn)了固定
支持介質(zhì)的電泳，樣品在固定的介質(zhì)中進(jìn)行電泳過(guò)程，減少了擴(kuò)散和對(duì)流等干擾作用。較初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜，目前這些介質(zhì)在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)應(yīng)用
得較少。在很長(zhǎng)一段時(shí)間里，小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進(jìn)行分離、分析，但目前則一般使用更靈敏的
技術(shù)如HPLC等來(lái)進(jìn)行分析。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì)，操作簡(jiǎn)單、方便。但對(duì)于復(fù)雜的生物大分子則分離效果較差。凝膠作為支持介質(zhì)的引入大大促進(jìn)了
電泳技術(shù)的發(fā)展，使電泳技術(shù)成為分析蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的重要手段之一。較初使用的凝膠是淀粉凝膠，但目前使用得較多的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰
胺凝膠。蛋白質(zhì)電泳主要使用聚丙烯酰胺凝膠。
電泳是指帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。許多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán)，它們?cè)谀硞€(gè)特定的pH
值下可以帶正電或負(fù)電，在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下，由于待分離樣品中
各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)。
電泳裝置主要包括兩個(gè)部分：電源和電泳槽。電源提供直流電，在電泳槽中產(chǎn)生電場(chǎng)，驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電
電泳裝置主要包括兩個(gè)部分：電源和電泳槽。電源提供直流電，在電泳槽中產(chǎn)生電場(chǎng)，驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電
泳是較為常見的一種，常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板，玻璃板兩邊由塑料條隔開，在玻璃平板中間制備電泳
凝膠，凝膠的大小通常是12cm? 14 cm，厚度為1mm～2 mm，近年來(lái)新研制的電泳槽，膠面更小、更薄，以節(jié)省試劑和縮短電泳時(shí)間。制膠時(shí)在凝膠溶液中放一個(gè)
塑料梳子，在膠聚合后移去，形成上樣品的凹槽。水平式電泳，凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上，用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳緩沖液，或?qū)⒛z直接浸入緩
沖液中。由于pH值的改變會(huì)引起帶電分子電荷的改變，進(jìn)而影響其電泳遷移的速度，所以電泳過(guò)程應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行的，緩沖液可以保持待分離物的帶電
性質(zhì)的穩(wěn)定。
E=V/L
為了更好的了解帶電分子在電泳過(guò)程中是如何被分離的，下面簡(jiǎn)單介紹一下電泳的基本原理。在兩個(gè)平行電極上加一定的電壓(V)，就會(huì)在電極中間產(chǎn)生電場(chǎng)強(qiáng)度
(E)，上式中L是電極間距離。
在稀溶液中，電場(chǎng)對(duì)帶電分子的作用力(F)，等于所帶凈電荷與電場(chǎng)強(qiáng)度的乘積：
F=q*E
上式中q是帶電分子的凈電荷，E是電場(chǎng)強(qiáng)度。
這個(gè)作用力使得帶電分子向其電荷相反的電極方向移動(dòng)。在移動(dòng)過(guò)程中，分子會(huì)受到介質(zhì)粘滯力的阻礙。粘滯力(F’)的大小與分子大小、形狀、電泳介質(zhì)孔徑大
小以及緩沖液粘度等有關(guān)，并與帶電分子的移動(dòng)速度成正比，對(duì)于球狀分子，F(xiàn)’的大小服從Stokes定律，即：F’=6πrηυ式中r是球狀分子的半徑，η是緩沖
液粘度，υ是電泳速度(υ= d / t，單位時(shí)間粒子運(yùn)動(dòng)的距離，cm / s )。當(dāng)帶電分子勻速移動(dòng)時(shí)： F = F’，∴ q·E = 6πrηυ
電泳遷移率(m)是指在單位電場(chǎng)強(qiáng)度(1V/cm)時(shí)帶電分子的遷移速度：
所以：
v/E=Q/6πrη
這就是遷移率公式，由上式可以看出，遷移率與帶電分子所帶凈電荷成正比，與分子的大小和緩沖液的粘度成反比。
用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)分子量時(shí)，實(shí)際使用的是相對(duì)遷移率mR。即：
上式中：d－帶電粒子泳動(dòng)的距離，t－電泳的時(shí)間，V－電壓，L－兩電極交界面之間的距離，即凝膠的有效長(zhǎng)度。因此，相對(duì)遷移率mR就是兩種帶電粒子在凝膠
v/E=Q/6πrη
這就是遷移率公式，由上式可以看出，遷移率與帶電分子所帶凈電荷成正比，與分子的大小和緩沖液的粘度成反比。
用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)分子量時(shí)，實(shí)際使用的是相對(duì)遷移率mR。即：
上式中：d－帶電粒子泳動(dòng)的距離，t－電泳的時(shí)間，V－電壓，L－兩電極交界面之間的距離，即凝膠的有效長(zhǎng)度。因此，相對(duì)遷移率mR就是兩種帶電粒子在凝膠
中泳動(dòng)遷移的距離之比。
帶電分子由于各自的電荷和形狀大小不同，因而在電泳過(guò)程中具有不同的遷移速度，形成了依次排列的不同區(qū)帶而被分開。即使兩個(gè)分子具有相似的電荷，
如果它們的分子大小不同，由于它們所受的阻力不同，因此遷移速度也不同，在電泳過(guò)程中就可以被分離。有些類型的電泳幾乎完全依賴于分子所帶的電荷不同
進(jìn)行分離，如等電聚焦電泳；而有些類型的電泳則主要依靠分子大小的不同即電泳過(guò)程中產(chǎn)生的阻力不同而得到分離，如SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳。分離后的樣
品通過(guò)各種方法的染色，或者如果樣品有放射性標(biāo)記，則可以通過(guò)放射性自顯影等方法進(jìn)行檢測(cè)。
