大腸桿菌轉(zhuǎn)化實驗時的注意點
大腸桿菌轉(zhuǎn)化實驗時的注意點 | 時間: May-21 15:30:57 | 分類:技術(shù)欄目
凌儀生物專業(yè)提供高速離心機，美國Bio-rad伯樂電泳儀，德國eppendorf艾本德移液器，PCR基因擴增儀，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機等實驗室儀器設(shè)備，要省錢，別錯過哦。有時候第一天涂的轉(zhuǎn)化平板、次日早晨轉(zhuǎn)化子可能長成的菌落比較大（1~2毫米以上，BL21就長得快），下一步轉(zhuǎn)化子做質(zhì)粒鑒定。這個情況下可以直接挑取一塊菌苔（勿帶出培養(yǎng)基），50微升酚/氯仿懸浮菌體，放置兩分鐘，加40微升TE抽提，上層TE吸出后再氯仿抽提一次，吸取上層TE即是質(zhì)粒提取液。提取的質(zhì)?？梢灾苯佑糜陔娪竞兔盖?。這樣操作，可以省去轉(zhuǎn)接液體試管的培養(yǎng)步驟，至少節(jié)省6~8小時的時間。但是，要在各步驟都控制得很好的情況下才能保證提取和酶切的效果，不同的實驗室或者操作者未必能夠很方便地重復(fù)。
轉(zhuǎn)化時一定要做一個宿主菌的對照，即重組質(zhì)粒涂板后再用宿主菌涂響應(yīng)抗性的平板，以確定第二天長出來的克隆是否正確，我當時做了三次轉(zhuǎn)化之后才發(fā)現(xiàn)不成功竟然是由于BL21可以在Amp（+）的平板上面生長。
